微生物学实验技术:水中细菌学检查

发布时间:

2022-11-16

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微生物学实验技术:水中细菌学检查

I  水中细菌总数的测定
一,目的要求
l.学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法.
2.了解水源水的平板菌落计数的原则.
二,基本原理
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数.由于水中细菌种类繁多,它们对营养和其他生长条件的要求差别很大,不可能找到一种培养基在一种条件下,使水中所有的细菌均能生长繁殖,因此,以一定的培养基平板上生长出来的菌落,计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值.目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基.
三,器材
l.培养基 肉膏蛋白胨琼脂培养基,无菌水.
2.仪器或其他用具 灭菌三角烧瓶,灭菌的带玻璃塞瓶,灭菌培养皿,灭菌吸管,灭菌试管等.
四,操作步骤
l.水样的采取
(1)自来水 先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌,再开放水龙头使水流5分钟后,以灭菌三角烧瓶接取水样,以待分析.
(2)池水,河水或湖水 应取距水面l0~15cm的深层水样,先将灭菌的带玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中取出,最好立即检查,否则需放入冰箱中保存.
培养基平板图片
2.细菌总数测定
(1)自来水
1用灭菌吸管吸取l毫升水样,注入灭菌培养皿中.共做两个平皿.
2分别倾注约15毫升己溶化并冷却到45摄氏度左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基,并立即在桌上作平面旋摇,使水样与培养基充分混匀.
3另取一空的灭菌培养皿,倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15毫升作空自对照.
4培养基凝固后,倒置于37摄氏度 温箱中,培养24h,进行菌落计数.
5两个平板的平均菌落数即为l毫升水样的细菌总数.
(2)池水,河水或湖水等
1稀释水样 取3个灭菌空试管,分别加入9毫升灭菌水.取l毫升水样注入第一管9毫升灭菌水内,摇匀,再自第一管取1毫升至下一管灭菌水内,如此稀释到第三管,稀释度分别为10-1,10-2与10-3.稀释倍数看水样污浊程度而定,以培养后平板的菌落数在30~300个之间的稀释度最为合适,若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数,则需继续稀释或减小稀释倍数.
一般中等污秽水样,取10-1,10-2,10-3三个连续稀释度,污秽严重的取10-2,10-3 ,10-4三个连续稀释度.
2自最后三个稀释度的试管中各取l毫升稀释水加入空的灭菌培养皿中,每一稀释度做两个培养皿.
3各倾注15毫升已溶化并冷却至45摄氏度左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基,立即放在桌上摇匀.
4凝固后倒置于37摄氏度培养箱中培养24h.
 
3.菌落计数方法
(1)先计算相同稀释度的平均菌落数.若其中一个平板有较大片状菌苔生长时,则不应采用,而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数.若片状菌苔的大小不到平板的一半,而其余的一半菌落分布又很均匀时,则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数,然后再计算该稀释度的平均菌落数.
 
(2)首先选择平均菌落数在30~300之间的,当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时,则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数(见表26-1,例1).
(3)若有两个稀释度的平均菌落数均在30~300之间,则按两者菌落总数之比值来决定.若其比值小于2,应采取两者的平均数;若大于2,则取其中较小的菌落总数(见表26-l,例2及例3).
(4)若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数(见表26-l,例4).
(5)若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数(见表26-l,例5).
(6)若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数(见表26-1,例6).