GB4789.2-2010食品卫生微生物学检验菌落总数测定

发布时间:

2022-12-27

作者:


GB4789.2-2010食品卫生微生物学检验菌落总数测定
 
食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定
 
Nationalfoodsafetystandard
Foodmicrobiologicalexamination:Aerobicplatecount
 
本标准代替GB/T4789.2-2008《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》.
 
本标准与GB/T4789.2-2008相比,主要修改如下:
 
修改了标准的中英文名称;
修改了菌落总数计算公式中的解释;
修改了培养基和试剂; 
 
本标准的附录A是规范性附录.
本标准所代替标准的历次版本发布情况为:
GB4789.2-1984、GB4789.2-1994、GB/T4789.2-2003、GB/T4789.2-2008.
 
食品安全国家标准
 
食品微生物学检验菌落总数测定
 
范围
 
本标准规定了食品中菌落总数(Aerobicplatecount)的测定方法.
 
本标准适用于食品中菌落总数的测定.
 
术语和定义
 
菌落总数aerobicplatecount
 
食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g(毫升)检样中形成的微生物菌落总数.
 
设备和材料
 
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
 
恒温培养箱:36摄氏度±1摄氏度,30摄氏度±1摄氏度
冰箱:2摄氏度至5摄氏度
恒温水浴箱:46±1摄氏度
天平:感量为0.1g
均质器
振荡器
 
无菌吸管:1毫升(具0.01毫升刻度)、10毫升(具0.1毫升刻度)或微量移液器及吸头.
无菌锥形瓶:容量250毫升、500毫升.
无菌培养皿:直径90毫米.
pH计或pH比色管或精密pH试纸.
放大镜或/和菌落计数器.
 
培养基和试剂
 
平板计数琼脂培养基:见附录A中A.1.
磷酸盐缓冲液:见附录A中A.2.
无菌生理盐水:见附录A中A.3
 
检验程序
 
菌落总数的检验程序见图1
图一 菌落总数的检验程序图片
 
操作步骤
 
样品的稀释
 
固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225毫升磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/分钟至10000r/分钟均质1分钟至2分钟,或放入盛有225毫升稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1分钟至2分钟,制成1:10的样品匀液.
 
液体样品:以无菌吸管吸取25毫升样品置盛有225毫升磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液.
 
用1毫升无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1毫升,沿管壁缓慢注于盛有9毫升稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100的样品匀液.
 
按6.1.3操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液.每递增稀释一次,换用1次1毫升无菌吸管或吸头.
 
根据对样品污染状况的估计,选择2个至3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1毫升样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿.同时,分别吸取1毫升空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照.
 
及时将15毫升至20毫升冷却到46摄氏度的平板计数琼脂培养基(可放置于46±1摄氏度恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀.
 
培养
 
待琼脂凝固后,将平板翻转,36±1摄氏度培养48h±2h.水产品30±1摄氏度培养72h±3h.
 
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4毫升),凝固后翻转平板,按6.2.1条件进行培养.
 
菌落计数
 
可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量.菌落计数以菌落形成单位(colony-for分钟gunits,CFU)表示.
 
选取菌落数在30CFU至300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数.低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计.每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数.
 
其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数.
 
当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数.
 
结果与报告
 
菌落总数的计算方法
 
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(毫升)样品中菌落总数结果.
 
若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按公式(1)计算:
 
计算公式图片一
 
式中:
 
N:样品中菌落数;
 
∑C:平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;
 
n1:第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;
 
n2:第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;
 
d:稀释因子(第一稀释度).
 
公式图片二
 
若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以相应稀释倍数计算.
 
若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算.
 
若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以稀释倍数计算.
 
若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU至300CFU之间,其中一部分小于30CFU或大于300CFU时,则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算.
 
菌落总数的报告
 
菌落数小于100CFU时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告.
 
菌落数大于或等于100CFU时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数;也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字.
 
若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延.
 
若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效.
 
称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/毫升为单位报告.
 
附录A
 
(规范性附录)
 
培养基和试剂
 
平板计数琼脂(platecountagar,PCA)培养基成分
 
胰蛋白胨5.0g,酵母浸膏2.5g,葡萄糖1.0g,琼脂15.0g,蒸馏水1000毫升,pH7.0±0.2
 
制法
 
将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH.分装试管或锥形瓶,121摄氏度高压灭菌15分钟.
 
磷酸盐缓冲液
 
成分
 
磷酸二氢钾(KH2PO4)34.0g,蒸馏水500毫升,pH7.2
 
制法
 
贮存液:称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500毫升蒸馏水中,用大约175毫升的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH,用蒸馏水稀释到1000毫升后贮存于冰箱.
 
稀释液:取贮存液1.25毫升,用蒸馏水稀释至1000毫升,分装于适宜容器中,121摄氏度高压灭菌15分钟.
 
无菌生理盐水
 
成分
 
氯化钠8.5g,蒸馏水1000毫升
 
制法
 
称取8.5g氯化钠溶于1000毫升蒸馏水中,121摄氏度高压灭菌15分钟.