GB与ChP中霉菌和酵母菌技术

发布时间:

2022-12-27

作者:


GB与ChP中霉菌和酵母菌技术

 
霉菌和酵母平板计数法的检验程序
检样;25g(毫升)样品+225毫升无菌稀释液,均质;10倍系列稀释;选择2到3个适宜稀释度的样品均液,每个平皿加入1毫升,每个稀释度做两个平行;每皿中加入20-25ms马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂;28摄氏度菌落计数;检验报告.
 
1样品的稀释
1.1固体和半固体样品:称取25g样品,加入225毫升无菌稀释液(蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液),充分振摇,或用拍击氏均质器拍打1至2分钟,制成1:10的样品均液.
1.2液体样品,以无菌吸管西区25毫升样品至盛有225毫升无菌稀释液的适宜容器内(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)或无菌均质袋中,充分振摇或用拍击式均质器拍打1至2分钟,制成1:10的样品均液.
1.3按照10倍系列稀释法,稀释2至3个适宜稀释度的样品,每个稀释度分别吸取1毫升样品均液于2个无菌平行皿中,同时分别吸取1毫升无菌稀释液加入2个无菌平皿作空白对照.
1.4及时将20至25毫升冷却至46摄氏度的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂倾注平皿
1.5  28摄氏度±1摄氏度培养箱中培养,观察并记录培养至5d的结果.
1.6 菌落计数,选取菌落数在10至150CFU的平板,根据菌落形态分别计数霉菌和酵母,霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌落蔓延.
1.7使用到的培养基:马铃薯葡萄糖琼脂(含氯霉素),孟加拉红琼脂配方:
蛋白胨 5.0g;磷酸二氢钾 1.0g;硫酸镁 0.5g;孟加拉红 0.033g;氯霉素0.1g;葡萄糖10.0g;琼脂20.0g;pH6.0±0.2(25摄氏度)
1.8结果
计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数;
若有两个稀释度平板上菌落数均在10-160CFU之间,则按照相应规定进行计算;
若所有平板上菌落数均大于160CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计数;
若所有平板上菌落数小于10CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算;
若所有稀释度包括液体样品原液平均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算;
若所有稀释度的平板菌落数均不在10CFU至160CFU之间,其中一部分小于10CFU或大于160CFU时,则以最近10CFU或160CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算.
二,中国药典
1.检验量
 除另有规定外,一般供试品的检验量为10g或10毫升;膜剂为100cm2;贵重药品,微量包装药品的检验量可以酌减.检验时,应从2个以上最小包装单位中抽取供试品,大蜜丸还不得少于4丸,膜剂还不少于4片.
2供试品的检查
 2.1TSA用于测定需要菌总数,SDA用于测定霉菌和酵母菌总数,阴性对照以稀释液代替供试液进行阴性对照试验,阴性对照试验应无菌生长.如果阴性对照有菌生长,应进行偏差调查.
2.2平皿法:包括倾注法和涂布法,注入15至20毫升温度不超过45摄氏度的培养基,SDA平板在20至25摄氏度培养5至7d,观察菌落生长情况,点计平板上生长的所有菌落数,计数并报告,菌落蔓延生长成片的平板不宜计数.点计菌落数后,计算各稀释级供试液的平均菌落数,按菌数报告规则报告菌数.若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15,则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上.
2.3菌数报告规则:霉菌和酵母菌总数测定易选取平均菌落数小于100cfu的稀释级,作为菌数报告的依据.如稀释级的平板均无菌落生长,或仅最低稀释级的平板有菌落生长,但平均菌落数小于1时,以<1乘以最低稀释倍数的值报告菌数.
2.4使用的培养基:SDA,但因SDA上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求时,可使用含抗生素(如氯霉素,庆大霉素)的SDA或其他选择性培养基(玫瑰红钠琼脂培养基)