控制菌检查法——耐胆盐革兰氏阴性菌

发布时间:

2022-12-27

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2015版药典中非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法——耐胆盐革兰氏阴性菌
 
该检查项下收载了“定性试验”和“定量试验”两部分内容,若标准规定为“不得检出耐胆盐革兰氏阴性菌”,则选择“定性试验”检验;若标准规定为“胆盐革兰氏阴性菌应小于10n cfu/g(ml)”,则选择“定量试验”检验.
 
耐胆盐革兰氏阴性菌的检验流程:样品制备成1:10的胰酪大豆胨液体培养基(TSB)供试液后,先在20~25℃预培养不超过2小时使细菌复苏但不增殖,再进行选择性增菌,最后通过VRBG筛选耐胆盐革兰氏阴性菌.
预培1:10TSB20-25摄氏度小于等于2小时;
选择性增菌 定性:取相当于1g至NmlEE;定量:取相当于0.1g,0.01g,0.001g至NmlEE;培养条件:30-35摄氏度,24-25小时;
分离 BRBG 30-35摄氏度,18-24小时. 
 
肠道增菌液体培养基(EE)对革兰氏阴性菌具有良好的选择性,经EE选择性增菌后革兰氏阳性菌应不生长,故若在随后的紫红胆盐葡萄糖琼脂上无菌生长,则表明样品中未污染有耐胆盐革兰氏阴性菌.尽管药典未明确说明VRBG培养基的抑菌能力,但该培养基通过脱氧胆酸钠和结晶紫等成分仍对革兰氏阳性菌具有较强的抑制能力.因此,若VRBG琼脂上有菌生长,且经革兰氏染色判断为革兰氏阴性菌,则表明样品已被耐胆盐革兰氏阴性菌污染;若为革兰氏阳性菌,则反映培养体系的选择性抑菌能力不足.
 
肠道菌增菌液体培养基(12722-1)
 
一,配方:g/L
明胶胰酶水解物10.0g
葡萄糖5.0g
二水合磷酸氢二钠 8.0g
磷酸二氢钾 2.0g
牛胆盐20.0g
亮绿  0.015g
pH7.2±0.2 (25℃)
 
二,配制方法:
称取本品45.0g于1L蒸馏水或去离子水中(可按比例增加或减少配制量),沸水浴煮沸30分钟,冷却至常温备用.
 
三,作用:用于耐胆盐革兰阴性菌的选择性增菌
 
四,原理:
明胶胰酶水解物提供蛋白质,维生素和氨基酸;葡萄糖提供碳源;磷酸氢二钠和磷酸二氢钾为缓冲剂;牛胆盐和亮绿为选择性抑菌剂,抑制非肠杆菌科细菌的生长.
 
五,产品外观:
脱水干粉培养基:淡黄色粉末
培养基溶解后:绿色溶液,澄清透明.
 
六,生长图片
 
紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基(12719-1)
 
1 配方:g/L
酵母浸出粉 3.0g
明胶胰酶水解物7.0g
葡萄糖10.0g
氯化钠5.0g
脱氧胆酸钠 1.5g
中性红0.03g
结晶紫0.002g
琼脂15.0g
pH7.4±0.2(25℃) 
2 配制方法:
称取本品41.5g于1L蒸馏水或去离子水中,搅拌煮沸溶解1分钟,冷却至50—55℃倾注平板.
3 作用:用于耐胆盐革兰阴性菌的选择性分离
4 原理:
明胶胰酶水解物和酵母浸出粉提供碳氮源和微量元素;葡萄糖是可发酵的糖类;氯化钠可维持均衡的渗透压;脱氧胆酸钠和结晶紫抑制革兰氏阳性菌,特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪肠球菌;中性红为pH指示剂.
5 产品外观
脱水干粉培养基:土黄色粉末
灭菌后融化状态培养基::淡红色,无不溶物
平板凝胶培养基:红色凝胶
6 生长图片