微生物实验无菌检查法

发布时间:

2022-12-27

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无菌检查法

1.配制后的培养基的储存 
制备好的培养基应保存在 2~25℃、避光的环境,若保存于非密闭容器中,一般在 3 周内使用;若保存于密闭容器中,一般可在一年内使用 若不即时使用,应置于无菌密闭容器中, 在 2 ~ 25 ℃ 、避光的环境 下保存,并在经验证的保存期内使用。

2.硫乙醇酸盐流体培养基

 

硫乙醇酸盐流体培养基图片

成分:胰酪胨 15.0g
葡萄糖/ /无水葡萄糖 5.5g/5.0g
L-胱氨酸 0.5g
硫乙醇酸钠(或硫乙醇酸) 0.5g(0.3 ml)
氯化钠 2.5g
新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml
琼脂 0.75g
水  1000ml
除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分混合,微温溶解,调节 pH 为弱碱性, 煮沸,滤清,加入葡萄糖和刃天青溶液,摇匀,调节 pH,使灭菌后在 25℃的 pH 值为 7.1±0.2。 分装至适宜的容器中, 其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层(粉红色)不超过培养基深度的 1/2。灭菌。在供试品接种前, 培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/51/ 3, 否则, 须经100℃水浴加热至粉红色消失(不超过 20 分钟),迅速冷却,只限加热一次,并防止被污染。
3.删除了0.5% 葡萄糖肉汤培养基(用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查 )这个培养基
4.菌液制备
4.1 白色念珠菌菌液的制备培养时间由24-48小时,便跟为2-3天;黑曲霉20~25℃培养 5~7 天, 新增或直到获得丰富的孢子
4.2菌液浓度由每 1ml 含菌数小于 100cfu(菌落形成单位),变更为适宜浓度的菌悬液 
5.培养基接种  
5.1硫乙醇酸盐流体培养基装量由12ml变更为适宜体积,TSB由9ml变更为适宜体积
5.2 接种量由小于100cfu变更为不大于100cfu
5.3 取消逐日观察结果
6. 无菌培养时间由14天变更为不少于14天
 
9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则环境浮游菌、沉降菌及表面微生物监测用培养基一般采用胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA) , 培养温度为30℃~35℃,时间为3~5天,必要时可加入适宜的中和剂。当监测结果有疑似真菌或考虑季节因素影响时,可增加沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA) ,培养温度为20℃~ 25℃,时间为5~7天。如需要,应根据环境污染微生物种群特性选择特定的培养条件和培养时间