2010药典微生物限度检查法培养基及其制备方法

发布时间:

2022-12-27

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2010药典微生物限度检查法培养基及其制备方法

培养基可按以下处方制备,也可使用按该处方生产的符合要求的脱水培养基.配制后,应采用验证合格的灭菌程序灭菌.
1.营养琼脂培养基,营养肉汤培养基,硫乙醇酸盐流体培养基,改良马丁培养基及改良马丁琼脂培养基照无菌检查法(附录ⅪH)制备.
 
胨5.0g 玫瑰红钠0.0133g
葡萄糖10.0g 琼脂14.0g
磷酸二氢钾1.0g 水1000毫升
硫酸镁0.5g
除葡萄糖,玫瑰红钠外,取上述成分,混合,微温溶解,滤过,加入葡萄糖,玫瑰红钠,分装,灭菌.
 
胨10.0g 琼脂14.0g
酵母浸出粉5.0g 水1000毫升
葡萄糖20.0g
除葡萄糖外,取上述成分,混合,微温溶解,滤过,加入葡萄糖,分装,灭菌.
4.胆盐乳糖培养基(BL)
 
胨20.0g 磷酸二氢钾1.3g
乳糖5.0g 牛胆盐2.0g
氯化钠5.0g (或去氧胆酸钠)(0.5g)
磷酸氢二钾4.0g 水1000毫升
除乳糖,牛胆盐(或去氧胆酸钠)外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,煮沸,滤清,加入乳糖,牛胆盐(或去氧胆酸钠),分装,灭菌.
5.乳糖胆盐发酵培养基
 
蛋白胨20.0g 0.04%溴甲酚紫水溶液25毫升
乳糖10.0g 水1000毫升
牛胆盐5.0g
除0.04%溴甲酚紫水溶液外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,加入0.04%溴甲酚紫指示液,根据要求的用量分装于含倒管的试管中.灭菌.所用倒管的规格应保证产气结果的观察.
6.曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)
 
营养琼脂培养基100毫升 曙红钠指示液2毫升
20%乳糖溶液5毫升 亚甲蓝指示液1.3至1.6毫升
取营养琼脂培养基,加热溶化后,冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液,摇匀,倾注平皿.
7.麦康凯琼脂培养基(MacC)
 
胨20.0g 1%中性红指示液3毫升
乳糖10.0g 琼脂14.0g
牛胆盐5.0g 水1000毫升
氯化钠5.0g
除乳糖,1%中性指示液,牛胆盐及琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,冷至约60℃,倾注平皿.
8.4-甲基伞形酮葡糖苷酸(4-methylumbelliferyl-β-D-glucuronide,MUG)培养基
 
胨10.0g 磷酸二氢钾(无水)0.9g
硫酸锰0.5毫克 磷酸氢二钠(无水)6.2g
硫酸锌0.5毫克 亚硫酸钠40毫克
硫酸镁0.1g 去氧胆酸钠1.0g
氯化钠5.0g MUG75毫克
氯化钙50毫克 水1000毫升
除MUG外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,
加入MUG,溶解,每管分装5毫升,灭菌.
9.三糖铁琼脂培养基(TSI)
 
胨20.0g 硫酸亚铁0.2g
牛肉浸出粉5.0g 硫代硫酸钠0.2g
乳糖10.0g 0.2%酚磺酞指示液12.5毫升
蔗糖10.0g 琼脂12.0g
葡萄糖1.0g 水1000毫升
氯化钠5.0g
除三种糖,0.2%酚磺酞指示液,琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,制成高底层(2至3cm)短斜面.
10.四硫磺酸钠亮绿培养基(TTB)
 
胨5.0g 硫代硫酸钠30.0g
牛胆盐1.0g 水1000毫升
碳酸钙10.0g
取上述成分,混合,微温溶解,灭菌.
临用前,取上述培养基,每10毫升加入碘试液0.2毫升和亮绿试液0.1毫升,混匀.
11.沙门,志贺菌属琼脂培养基(SS)
 
胨5.0g 硫代硫酸钠8.5g
牛肉浸出粉5.0g 中性红指示液2.5毫升
乳糖10.0g 亮绿试液0.33毫升
牛胆盐8.5g 琼脂16.0g
枸橼酸钠8.5g 水1000毫升
枸橼酸铁铵1.0g
除乳糖,中性红指示液,琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,滤过,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,灭菌,冷至60℃,倾注平皿.
12.胆盐硫乳琼脂培养基(DHL)
胨20.0g 枸橼酸钠1.0g
牛肉浸出粉3.0g 枸橼酸铁铵1.0g
乳糖10.0g 中性红指示液3毫升
蔗糖10.0g 琼脂16.0g
去氧胆酸钠1.0g 水1000毫升
硫代硫酸钠2.3g
除糖,指示液及琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余成分,摇匀,冷至60℃,倾注平皿.
13.溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基
胨10.0g 溴化十六烷基三甲铵0.3g
牛肉浸出粉3.0g 琼脂14.0g
氯化钠5.0g 水1000毫升
除琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.5±0.1,加入琼脂,加热溶化后,分装,灭菌,冷至60℃,倾注平皿.
14.亚碲酸盐肉汤培养基
临用前,取灭菌的营养肉汤培养基,每100毫升中加入新配制的1%亚碲酸钠(钾)试液0.2毫升,混匀,即得.
15.卵黄氯化钠琼脂培养基
胨6.0g 10%氯化钠卵黄液100毫升
牛肉浸出粉1.8g 琼脂14.0g
氯化钠30.0g 水650毫升
除10%氯化钠卵黄液外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.6±0.1,灭菌,待冷至约60℃,以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液,充分振摇,倾注平皿.
10%氯化钠卵黄液的制备取新鲜鸡蛋1个,以无菌操作取出卵黄,放入10%无菌氯化钠溶液100毫升中,充分振摇,即得.
16.甘露醇氯化钠琼脂培养基
胨10.0g 酚磺酞指示液2.5毫升
牛肉浸出粉1.0g 琼脂14.0g
甘露醇10.0g 水1000毫升
氯化钠75.0g
除甘露醇,酚磺酞指示液及琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节 pH值使灭菌后为7.4±0.2,加入琼脂,加热溶化后,滤过,分装,灭菌,冷至60℃,倾注平皿.
17.乳糖发酵培养基
胨20.0g0.04%溴甲酚紫指示液25毫升
乳糖10.0g 水1000毫升
除0.04%溴甲酚紫指示液外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,加入指示液,分装于含倒管的小试管中,每管3毫升.灭菌.
18.绿脓菌素(Pyocyanin)测定用培养基(PDP琼脂培养基)
胨20.0g 甘油10毫升
氯化镁(无水)1.4g 琼脂14.0g
硫酸钾(无水)10.0g 水1000毫升
取胨,氯化镁,硫酸钾和水混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入甘油及琼脂,加热溶化,混匀,分装于试管,灭菌,置成斜面.
19.梭菌增菌培养基
牛肉浸出粉10.0g 盐酸半胱氨酸0.5g
胨10.0g 氯化钠5.0g
酵母浸出粉3.0g 醋酸钠3.0g
可溶淀粉1.0g 琼脂0.5g
葡萄糖5.0g 水1000毫升
取上述成分,混合,加热煮沸使溶解,调节pH值使灭菌后为6.8±0.2,加热溶化,滤过,分装,灭菌.
20.哥伦比亚琼脂培养基
酪蛋白胰酶消化物10.0g 肉胃酶消化物5.0g
心胰酶消化物3.0g 氯化钠5.0g
玉米淀粉1.0g 琼脂15.0g
酵母浸出粉5.0g 水1000毫升
除琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.2,加入琼脂,加热溶化,滤过,分装,灭菌,冷至45至50℃,加入相当于20毫克庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素,混匀,倾注平皿.
21.沙氏葡萄糖液体培养基
葡萄糖40g 水1000毫升
蛋白胨10g
除葡萄糖外.取上述成分,混合,微温溶解,滤过.加入葡萄糖,溶解,
分装,灭菌.
沙氏葡萄糖琼脂培养基
葡萄糖40g 琼脂15至18g
蛋白胨10g 水1000毫升
除琼脂和葡萄糖外.混合,微温溶解,滤过.加入琼脂和葡萄糖,溶解,分装,灭菌.
23.念珠菌显色培养基(CHROMagar)
蛋白胨10.2g 琼脂15g
氢罂素0.5g, 灭菌水1000毫升
色素22.0g
除琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值至6.3±0.2.滤过,加入琼脂,加热煮沸,不断搅拌至琼脂完全溶解,倾注平皿.
24.1%吐温80-玉米琼脂培养基
黄色玉米粉40g 琼脂10至15g
聚山梨酯80 10毫升水1000毫升
取玉米粉,吐温80及蒸馏水500毫升,混合,65℃加热30分钟,混匀,用纱布滤过,补足原水量.取琼脂,水500毫升,混合,加热溶解.将以上两种溶液混合,摇匀,分装,灭菌.
试药
十四烷酸异丙酯Isopropyl Myristate〔C17H34O2=270.46〕
本品为无色液体.溶于乙醇,乙醚,丙酮,三氯甲烷或甲苯,不溶于水,甘油或丙二醇.约208℃分解.
二盐酸二甲基对苯二胺N,N-dimethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride〔C8H12N2•2HCl=209.12〕
本品为白色或灰白色结晶性粉末;置空气中色渐变暗;易吸潮.在水或乙醇中溶解.
溴化十六烷基三甲铵Cetyl Trimethylammonium Bromide〔C19H42BrN=364.46〕
本品为白色结晶.在水中溶解,在乙醇中微溶,在乙醚中不溶.
中性红Neutral Red〔C15H17N4Cl=288.78〕
本品为深绿色或棕黑色粉末.在水或乙醇中溶解.
牛肉浸出粉Beef Extract Powder
本品为米黄色粉末,在水中溶解.
牛胆盐Ox Bile Salt
本品为淡黄色或黄棕色粉末,味苦而甜,具吸湿性.在水或醇中易溶.甘露醇Mannitol〔C6H14O6=182.17〕
本品为白色结晶;无臭,味甜.在水中溶解,在乙醇中微溶.
4-甲基伞形酮葡糖苷酸 4-Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide,MUG〔C18H16O9=376.3〕
本品为白色针状结晶.在水,乙醇或乙醚中溶解.在稀氢氧化钠溶液中分解.
去氧胆酸钠Sodium Deoxycholate〔C24H39NaO4=414.56〕
本品为白色结晶性粉末,味苦.易溶于水,微溶于醇,不溶于醚.
亚碲酸钠Sodium Tellurite〔Na2TeO3=221.58〕
本品为白色粉末.在热水中易溶,在水中微溶.
玫瑰红钠(四氯四碘荧光素钠)Rose Bengal Sodium Salt〔C20H2Cl4I4Na2O5=1017.6〕
本品为棕红色粉末.在水中溶解,溶液呈紫色,无荧光;在硫酸中溶解,溶液为棕色.
单硬脂酸甘油酯Glycerol Monostearte〔C21H42O4=358.56〕
本品为白色或黄色蜡状.在热有机溶剂或矿物油中溶解,在水中不溶,但与水能乳化.
枸橼酸钠Sodium Citrate〔C6H5Na3O7•2H2O=294.10〕
本品为白色结晶或粉末.在水中易溶,在乙醇中不溶.
枸橼酸铁铵Ammonium Ferric Citrate〔C12H22FeN3O14=488.16〕
本品为棕红色或绿色鳞片或粉末,易潮解,见光易还原成亚铁.在水中溶解,在醇或醚中不溶.
胰蛋白胨Tryptone
本品为米黄色粉末.在水中溶解.
硫酸锌Zinc Sulfate〔ZnSO4•7H2O=287.56〕
本品为白色结晶,颗粒或粉末.在水中易溶,在甘油中溶解,在乙醇中微溶.
硫酸锰Manganese Sulfate〔MnSO4•H2O=169.02〕
本品为粉红色结晶.在水中溶解,在乙醇中不溶.
酪蛋白胰酶消化物(胰酪胨或酪胨)PancreaticDigest of Casein
本品为黄色或浅黄色颗粒.以干酪素为原料经胰酶水解,活性炭脱色处理,精制而成.
试液
二盐酸二甲基对苯二胺试液取二盐酸二甲基对苯二胺0.1g,加水10毫升,即得.需新鲜少量配制,于冷处避光保存,如试液变成红褐色,不可使用.
亚碲酸钠(钾)试液 取亚碲酸钠(钾)0.1g,加新鲜煮沸后冷至50℃的水10毫升使溶解.
玫瑰红钠试液 取玫瑰红钠0.1g,加水使溶解成75毫升.
亮绿试液 取亮绿0.1g,加水100毫升使溶解.
盐酸试液取盐酸8.4毫升,加水使稀释成100毫升.
靛基质试液取对二甲氨基苯甲醛5.0g,加入戊醇(或丁醇)75毫升,充分振摇,使完全溶解后,再取浓盐酸25毫升徐徐滴入,边加边振摇,以免骤热导致溶液色泽变深,或取对二甲氨基苯甲醛1.0g,加入95%乙醇95毫升,充分振摇,使完全溶解后,取盐酸20毫升徐徐滴入.
碘试液取碘6g与碘化钾5g,加水20毫升使溶解.
过氧化氢试液取浓过氧化氢溶液(30%),加水稀释成3%的溶液.临用时配制.
指示液
中性红指示液取中性红1.0g,研细,加95%乙醇60毫升使溶解,再加水至100毫升.
变色范围pH6.8至8.0(红→黄).
亚甲蓝指示液取亚甲蓝0.5g,加水使溶解成100毫升.
酚磺酞指示液取酚磺酞1.0g,加1mol/L氢氧化钠溶液2.82毫升,使溶解,再加水至100毫升.变色范围pH6.8至8.4(黄→红).
溴甲酚紫指示液取溴甲酚紫1.6g,加95%乙醇使溶解成100毫升.变色范围pH5.2至6.8(黄→紫).
曙红钠指示液取曙红钠2.0g,加水使溶解成100毫升.
微生物限度标准
非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害而制订的.药品的生产,贮存,销售过程中的检验,原料及辅料的检验,新药标准制订,进口药品标准复核,考察药品质量及仲裁等,除另有规定外,其微生物限度均以本标准为依据.
1.制剂通则,品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂应符合无菌检查法规定.
2.口服给药制剂
细菌数每1g不得过1000cfu.每1毫升不得过100cfu.霉菌和酵母菌数每1g或1毫升不得过100cfu.
大肠埃希菌每1g或1毫升不得检出.
3.局部给药制剂
3.1用于手术,烧伤或严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定.
3.2眼部给药制剂
细菌数每1g或1毫升不得过10cfu.
霉菌和酵母菌数每1g或1毫升不得检出.
金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌,大肠埃希菌每1g或1毫升不得检出.
3.3耳,鼻及呼吸道吸入给药制剂
细菌数每1g,1毫升或10cm2不得过100cfu.
霉菌和酵母菌数每1g,1毫升或10cm2不得过10cfu.
金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌每1g,1毫升或10cm2不得检出.
大肠埃希菌鼻及呼吸道给药的制剂,每1g,1毫升或10cm2不得检出.
3.4阴道,尿道给药制剂
细菌数每1g,1毫升或10cm2不得过100cfu.
霉菌和酵母菌数每1g,1毫升或10cm2应小于10cfu.
金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌,白色念珠菌每1g,1毫升或10cm2不得检出.
3.5直肠给药制剂
细菌数每1g不得过1000个.每1毫升不得过100cfu.
霉菌和酵母菌数每1g或1毫升不得过100cfu.
金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌每1g或1毫升不得检出.
3.6其他局部给药制剂
细菌数每1g,1毫升或10cm2不得过100cfu.
霉菌和酵母菌数每1g,1毫升或10cm2不得过100cfu.
金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌每1g,1毫升或10cm2不得检出.
4.含动物组织(包括提取物)的口服给药制剂每10g或10毫升还不得检出沙门菌.
5.有兼用途径的制剂应符合各给药途径的标准.
6.霉变,长螨者以不合格论.
7.原料及辅料参照相应制剂的微生物限度标准执行.