荚膜染色法实验是怎么做的?

发布时间:

2022-12-24

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荚膜染色法

一 目的要求
学习并掌握荚膜染色的基本方法.
二 基本原理
荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质,其主要成分是多糖类,不易被染色,故常用衬托染色法,即将菌体和背景着色,而把不着色且透明的荚膜衬托出来.荚膜很薄,易变形,因此,制片时一般不用热固定.
三 器材
圆褐固氮菌(Azotobacter chroococcum);
荚膜染色液,纯甲醇等.
四 操作步骤
方法一:
1 在载玻片一端滴一滴无菌水,取少许培养了72小时的圆褐固氮菌在水滴中制成悬液.取一滴新配好的黑色素溶液(也可用绘图墨水)与菌悬液混合,另取一块载玻片作为推片,将推片一端平整的边缘与菌悬液以30度角接触后,顺势将菌悬液推向前方,使其成匀薄的一层,风干.
2 用纯甲醇固定1分钟.
3 加番红液数滴于涂片上,冲去残余甲醇,并染30秒钟,以细水流适当冲洗,吸干后油镜检查,背景黑色,荚膜无色,细胞红色.
方法二:
  ① 将刚果红水溶液和明胶水溶液各一滴滴于干净载片上;用接种环蘸取细菌培养液或悬浮液在载片上于上述两滴溶液混匀,自然干燥;滴加1%HCl冲洗,使涂片呈蓝色;用蒸馏水漂洗,除去HCl;,用美蓝复染1分钟,水洗,自然干燥后镜检. 
镜检:有荚膜的菌,菌体蓝色,荚膜不着色,背景蓝紫色;无荚膜的菌,菌体蓝色,背景蓝紫色.由于干燥菌体收缩,菌体四周也可能有一圈狭窄的不着色环,但这不是荚膜.荚膜不着色的部分宽. 
方法三:TyLer法 
a  涂片:按常规法涂片,在空气中自然干燥. 
b 染色:用结晶紫冰醋酸染5-7分钟. 
c 用20%CuSO4水溶液洗,再用毛边纸吸干. 
d 镜检并观察结果:荚膜蓝紫色,细胞暗蓝色.
方法四: 湿墨汁法
a 制菌液:加一滴墨汁于洁净的波片上,并挑少量菌与其充分混合. 
b 加盖玻片:放一清洁盖玻片于混合液上,然后在盖玻片上放一张滤纸,向下 轻压,吸收多余菌液. 
c 镜检. 
 
五 实验报告
1 结果
绘图说明圆褐固氮菌菌体及荚膜的形状.
2 思考题
为什么在荚膜染色中一般不用热固定,而用纯甲醇进行固定?
 
荚膜染色液
1 黑色素水溶液
黑色素 5g
蒸馏水 100ml
福尔马林(40%甲醛) 0 5ml
将黑色素在蒸馏水中煮沸5分钟,然后加入福尔马林作防腐剂.
2 番红染液
与革兰氏染液中番红复染液相同.