滤膜法测定水中大肠菌群

发布时间:

2022-12-27

作者:

培养基干粉颗粒


滤膜法测定水中大肠菌群

实验目的:学习使用滤膜法测定水中大肠菌群.
 
实验原理:滤膜法是采用滤膜过滤器过滤水样,使其中的细菌截留在滤膜上,然后将滤膜放在适当的培养基上进行培养,大肠菌群可直接在膜上生长,从而可直接计数.所用滤膜是一种多孔硝化纤维膜或乙酸纤维膜,其孔径约0.45μm.
 
试剂与器材:无菌水,河水或湖水;
伊红美蓝琼脂培养基:蛋白胨10克, 乳糖10克,K2HPO42克, 伊红Y0.4 克, 美蓝0.065 克,琼脂20 克,水1000ml,pH 7.2
 
器材:灭菌过滤器(可用高压蒸汽灭菌),镊子,滤膜,烧杯等.
 
实验内容 
 
滤膜灭菌:将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中,加热煮沸15分钟,共煮沸三次,前两次煮沸后换水洗涤2-3次再煮,以洗去滤膜上残留的溶剂.
滤膜过滤器装置:将滤膜装入过滤器中,过滤装置进行高压灭菌.
加水样过滤:对未知的水样可做三个稀释度,选择菌落数合适的稀释度进行计算.用针筒取河水或湖水10mL,缓慢过滤.
滤完后,加入等量的灭菌水继续抽滤,目的是冲洗针筒壁.
滤毕,用灭菌镊子取滤膜边缘,将没有细菌的一面紧贴在伊红美蓝琼脂平板上.滤膜与培养基之间不得有气泡.
将平板倒置于37℃下培养22-24小时.
挑取符合大肠菌群菌落特征(红色,有金属光泽)的菌落,进行革兰氏染色、镜检.
计算:1升水样中的大肠菌群数=滤膜上的大肠菌群菌落数×10
 
滤膜法测大肠杆菌