掌握微生物实验细菌的单染色法的研究

发布时间:

2022-11-16

作者:

国内细菌微生物培养基生产企业


细菌的单染色法的研究
 
一、基本原理
所谓单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法.此法操作简便,适用于菌体一般形态的观察.
在中性、碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,所以常用碱性染料进行染色.碱性染料并不是碱,和其他染料一样是一种盐,电离时染料离子带正电,易与带负电荷的细菌结合而使细菌着色.例如,美蓝(亚甲蓝)实际上是氯化亚甲蓝盐(methylenebluechloride,缩写为MBC),它可被电离成正、负离子
MBC→methylene blue++chloride-
带正电荷的染料离子可使细菌细胞染成蓝色.常用的碱性染料除美蓝外,还有结晶紫(crystal violet)、碱性复红(basicfu-chsin)、番红(又称沙黄,safranine)等.
细菌体积小,较透明,如未经染色常不易识别,而经着色后,与背景形成鲜明的对比,使易于在显微镜下进行观察.
 
二、实验器材
显微镜,酒精灯,载玻片,接种环,双层瓶,擦镜纸,生理盐水;
吕氏碱性美蓝染色液,石炭酸复红染色液;
金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌.
 
三、实验操作步骤
步骤1:涂片 取两块干净的载玻片,各滴一小滴生理盐水于载玻片中央,用无菌操作,分别挑取金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌于二载玻片的水滴中(每一种菌制一片),调匀并涂成薄膜.注意滴生理盐水时不宜过多,涂片必须均匀.
步骤2.干燥 于室温中自然干燥.
步骤3.固定 涂片面向上,于火焰上通过2至3次,使细胞质凝固,以固定细菌的形态,并使其不易脱落.但不能在火焰上烤,否则细菌形态将毁坏.
步骤4.染色 放标本于水平位置,滴加染色液于涂片薄膜上,染色时间长短随不同染色液而定.吕氏碱性美蓝染色液约染2至3分钟,石炭酸复红染色液约染1至2分钟.
步骤5.水洗 染色时间到后,用自来水冲洗,直至冲下之水无色时为止.注意冲洗水流不宜过急,过大,水由玻片上端流下,避免直接冲在涂片处.冲洗后,将标本晾干或用吹风机吹干,待完全干燥后才可置油镜下观察.
步骤6.镜检:进行显微镜观察.
 
金黄色葡萄球菌增菌培养基:胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)